Kio estas poliakrilamida ĝela elektroforezo?

Poliakrilamida ĝelo elektroforezo

Gelelektroforezo estas fundamenta tekniko en laboratorioj trans la biologiaj disciplinoj, permesante la apartigon de makromolekuloj kiel ekzemple DNA, RNA kaj proteinoj. Malsamaj apartigmedioj kaj mekanismoj permesas al subaroj de tiuj molekuloj esti apartigitaj pli efike ekspluatante siajn fizikajn karakterizaĵojn. Por proteinoj aparte, poliakrilamida ĝelelektroforezo (PAĜO) ofte estas la tekniko de elekto.

PAĜO estas tekniko, kiu apartigas makromolekulojn kiel proteinojn bazitajn sur ilia elektroforetika moviĝeblo, tio estas, la kapablo de analitoj moviĝi al elektrodo de la kontraŭa ŝargo. En PAĜO, tio estas determinita de la ŝargo, grandeco (molekula pezo) kaj formo de la molekulo. Analitoj moviĝas tra poroj formitaj en poliakrilata ĝelo. Male al DNA kaj RNA, proteinoj varias en pagendaĵo laŭ la aminoacidoj korpigitaj, kiuj povas influi kiel ili funkcias. Aminoacidŝnuroj ankaŭ povas formi sekundarajn strukturojn kiuj influas sian ŝajnan grandecon kaj sekve kiel ili povas moviĝi tra la poroj. Povas tial foje esti dezirinde denaturigi proteinojn antaŭ elektroforezo por liniigi ilin se pli preciza takso de grandeco estas postulata.

SDS-PAĜO

Natrio-dodecilsulfato poliakrilamida ĝelelektroforezo estas tekniko uzita por apartigi proteinmolekulojn de masoj 5 ĝis 250 kDa. La proteinoj estas apartigitaj nur surbaze de sia molekula pezo. Natria dodecilsulfato, anjona surfaktant, estas aldonita en la preparado de ĝeloj, kiu maskas la internajn ŝargojn de la proteinprovaĵoj kaj donas al ili similan ŝargon al masproporcio. En simplaj vortoj, ĝi malnaturas la proteinojn kaj donas al ili negativan ŝarĝon.

Denaska PAĜO

Denaska PAĜO estas tekniko kiu uzas ne-denaturedigitajn ĝelojn por la apartigo de proteinoj. Male al SDS-PAĜO, neniu denatura agento estas aldonita en la preparado de ĝeloj. Kiel rezulto, la apartigo de proteinoj okazas surbaze de ŝargo kaj grandeco de la proteinoj. En ĉi tiu tekniko, la formo, faldado kaj aminoacido ĉenoj de la proteinoj estas la faktoroj de kiuj dependas la apartigo. La proteinoj ne estas difektitaj en ĉi tiu procezo, kaj povas esti reakiritaj post la kompletigo de apartigo.

Kiel funkcias poliakrilamida ĝela elektroforezo (PAĜO)?

La baza principo de PAĜO estas apartigi analitojn pasante ilin tra la poroj de poliakrilamida ĝelo uzante elektran kurenton. Por atingi tion, akrilamida-bisakrilamida miksaĵo estas polimerigita ( poliakrilamido) per aldono de amonia persulfato (APS). La reago, kiu estas katalizita de tetrametiletilendiamino (TEMED), formas reton kiel strukturon kun poroj tra kiuj analitoj povas moviĝi (Figuro 2). Ju pli alta la procento de totala akrilamido inkluzivita en la ĝelo, des pli malgranda la pora grandeco, do des pli malgrandaj la proteinoj kiuj povos trapasi. La rilatumo de akrilamido al bisakrilamido ankaŭ efikos porgrandecon sed tio ofte estas konservita konstanta. Pli malgrandaj poroj ankaŭ reduktas la rapidecon ĉe kiu malgrandaj proteinoj povas moviĝi tra la ĝelo, plibonigante sian rezolucion kaj malhelpante ilin forkuri en la bufron rapide kiam fluo estas aplikita.

Ekipaĵo por Poliakrilamida Ĝelo Elektroforezo

Ĝela Elektroforeza Ĉelo (Tanko/Ĉambro)
La ĝeltanko por poliakrilamida ĝelelektroforezo (PAĜO) diferencas de la agaroza ĝeltanko. La agarose-ĝeltanko estas horizontala, dum la PAGE-tanko estas vertikala. Per vertikala elektroforezĉelo (tanko/kamero), maldika ĝelo (normale 1.0mm aŭ 1.5mm) estas verŝita inter du vitraj platoj kaj muntita tiel ke la fundo de la ĝelo estas mergita en bufro en unu kamero kaj la supro estas mergita en bufro. en alia ĉambro. Kiam fluo estas aplikata, malgranda kvanto de bufro migras tra la ĝelo de la supra kamero al la malsupra kamero. Kun fortaj krampoj por garantii, ke la asembleo restas en vertikala pozicio, la ekipaĵo faciligas rapidajn ĝelojn kun eĉ malvarmigo rezultigante apartajn bendojn.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) produktas gamon da grandecoj de poliakrilamidaj ĝelaj elektroforezaj ĉeloj (tankoj/kameroj). La modeloj DYCZ-20C kaj DYCZ-20G estas vertikalaj elektroforezĉeloj (tankoj/kameroj) por DNA-sekvenca analizo. Kelkaj el la vertikalaj elektroforezĉeloj (tankoj/kameroj) estas kongruaj kun makulsistemo, kiel la modelo DYCZ-24DN, DYCZ-25D kaj DYCZ-25E estas kongruaj kun Western Blotting-sistemo modelo DYCZ-40D, DYCZ-40G kaj DYCZ-40F, kiuj estas uzataj por transdoni la proteinmolekulon de la ĝelo al membrano. Post SDS-PAGE elektroforezo, Western Blotting estas tekniko por detekti specifan proteinon en proteinmiksaĵo. Vi povas elekti ĉi tiujn makulsistemojn laŭ la eksperimentaj postuloj.

Elektroforezo Elektroprovizo
Por provizi la elektron por funkcii la ĝelon, vi bezonos elektroforezan elektrofonton. Ĉe Liuyi Biotechnology ni provizas gamon da elektroforezaj elektrofontoj por ĉiuj aplikoj. La modelo DYY-12 kaj DYY-12C kun alta stabila tensio kaj kurento povas plenumi elektroforezon de alta tensio postulo. Ĝi havas la funkcion de stando, tempigo, VH kaj paŝo-post-paŝa aplikaĵo. Ili estas idealaj por IEF kaj DNA-sekvenca elektroforezapliko. Por ĝenerala proteino kaj DNA-elektroforezo apliko, ni havas la modelon DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, kaj tiel plu, kiuj ankaŭ estas varmaj vendaj elektrofontoj kun elektroforezaj ĉeloj (tankoj/kameroj). Ĉi tiuj povas esti uzataj por la meza kaj malalta tensio elektroforezo aplikoj, kiel ekzemple por lerneja laboratorio uzo, hospitala laboratorio kaj tiel plu. Pli da modeloj por elektrofontoj, bonvolu viziti nian retejon.

La marko Liuyi havas pli ol 50-jaran historion en Ĉinio kaj la kompanio povas provizi stabilajn kaj altkvalitajn produktojn tra la tuta mondo. Tra la disvolvado de jaroj, ĝi estas inda je via elekto!

Por pliaj informoj pri ni, bonvolu kontakti nin retpoŝte[retpoŝto protektita] or [retpoŝto protektita].

Referencoj por Kio estas poliakrilamida ĝela elektroforezo?
1. Karen Steward PhD Poliakrilamida ĝela elektroforezo, Kiel ĝi Funkcias, Teknikaj Variaĵoj kaj Ĝiaj Aplikoj