Eksperimenta Principo
Hemoglobina elektroforezo celas detekti kaj konfirmi diversajn normalajn kaj nenormalajn hemoglobinojn.
Pro la malsamaj ŝargoj kaj izoelektraj punktoj de malsamaj hemoglobinspecoj, en certa pH-bufrsolvo, kiam la izoelektra punkto de hemoglobino estas pli malalta ol la pH de la bufrosolvo, hemoglobino portas negativan ŝargon kaj migras direkte al la anodo dum elektroforezo. Male, hemoglobino kun pozitiva ŝargo moviĝas al la katodo.
Sub certa tensio kaj post specifa elektroforeztempo, hemoglobinoj kun malsamaj ŝargoj kaj molekulaj pezoj elmontras malsamajn migrajn direktojn kaj rapidecojn. Tio enkalkulas la apartigon de apartaj zonoj, kaj posta kolorimetra aŭ elektroforetika skana analizo povas esti farita sur tiuj zonoj por kvantigi diversajn hemoglobinojn. La plej ofte uzita metodo estas pH 8.6 celuloza acetata membrana elektroforezo.
Ene de la citoplasmo, etilenglikolgrupoj (CHOH-CHOH) ĉeestantaj en glikogenaj aŭ polisakaridaj substancoj (kiel mukopolisakaridoj, mukoproteinoj, glikoproteinoj, glikolipidoj, ktp.) estas oksigenitaj per perioda acido kaj konvertitaj en aldehidogrupojn (CHO-CHO). Tiuj aldehidgrupoj kombinas kun la senkolora purpurruĝa Schiff-reakciilo, formante purpurruĝan tinkturfarbaĵon kiu deponiĝas kie polisakaridoj ĉeestas en la ĉelo. Tiu reago estas konata kiel perioda acid-Schiff (PAS) makulado, antaŭe referita kiel glikogenmakulado.
Eksperimenta Metodo
Materialoj:Celuloza acetatomembrane, elektroforeza aparato(DYCP-38C kaj elektroprovizo DYY-6C), Supera Ekzempla Ŝarĝa Ilo (pipeto), spektrofotometro, kolorimetraj kuvetoj, bufroj.
Bufro:
(1) pH 8.6 TEB Buffer: Pezu 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g borata acido, kaj aldonu distilitan akvon al 1000 ml.
(2) Borato Buffer: Pezu 6,87 g borakson kaj 5,56 g boratan acidon, kaj aldonu distilitan akvon al 1000 ml.
Proceduro:
Priparo de Hemoglobina Solvo
Prenu 3 ml da sango enhavanta heparinon aŭ natriocitrato kiel antikoagulanto. Centrifugu je 2000 rpm dum 10 minutoj kaj forĵetu la plasmon. Lavu la ruĝajn globulojn tri fojojn kun fiziologia salo (750 rpm, 5 minutoj centrifugado ĉiufoje). Centrifugu je 2200 rpm dum 10 minutoj kaj forĵetu la supernatante. Aldonu egalan kvanton da distilita akvo, tiam aldonu 0,5 fojojn la volumenon de karbona tetraklorido. Skuu vigle dum 5 minutoj, kaj poste centrifugu je 2200 rpm dum 10 minutoj por kolekti la supran Hb-solvon por posta uzo.
Trempu la Membranon
Tranĉu la celulozan acetatmembranon en striojn de 3 cm × 8 cm. Trempu ilin en tampono de pH 8.6 TEB ĝis plene saturitaj, tiam forigu kaj sekigu per filtrila papero.
Ekvidi
Uzu pipeton por ekvidi 10 μl de la hemoglobina solvo vertikale sur la celuloza acetatmembrano (la malglata flanko), ĉirkaŭ 1,5 cm de la rando.
Elektroforezo
Verŝu la boratan bufran solvon en la elektroforezan ĉambron. Metu la celulozan acetatmembranon kun la makulflanko ĉe la katoda fino de la ĉambro. Kuru je 200 V dum 30 minutoj.
Elucio
Eltranĉu la HbA kaj HbA2-zonojn, metu ilin en apartajn provtubojn, kaj aldonu respektive 15 ml kaj 3 ml da distilita akvo. Milde skuu por eligi la hemoglobinon tute, tiam miksi.
Kolorimetrio
Nuligi la absorbadon uzante distilitan akvon por la solvaĵo kaj mezuru la absorbadon ĉe 415 nm.
Kalkulo
HbA2(%) = Sorbaco de HbA2-tubo / (Sorbaco de HbA-tubo × 5 + Sorbado de HbA2-tubo) × 100%
Kalkulo de Eksperimentaj Rezultoj
Referenca Intervalo por pH 8.6 TEB Buffer Celuloza Acetato Elektroforezo: HbA> 95%, HbA2 1% -3.1%
Notoj
Elektroforeztempo ne devus esti tro longa. La celuloza acetatmembrano ne devus sekiĝi dum elektroforezo. Ĉesu elektroforezon kiam HbA kaj HbA2 estas klare apartigitaj. Longedaŭra elektroforezo povas kaŭzi banddisvastigon kaj malklariĝon.
Evitu uzi tro da specimeno. Troa hemoglobina likvaĵo povas konduki al bando-malligo aŭ nesufiĉa makulo, rezultigante false altigitajn HbA-nivelojn.
Malhelpu poluadon de la celuloza acetatmembrano kun proteinoj.
La fluo ne estu tro alta; alie, hemoglobingrupoj eble ne disiĝas.
Ĉiam inkluzivu specimenojn de normalaj individuoj kaj necesajn konatajn eksternormajn hemoglobinojn kiel kontrolojn.
Beijing Liuyi Biotechnology fabrikas la profesian elektroforezan tankon por hemoglobina elektroforezo kiu estas la modeloDYCP-38Ctanko de elektroforezo de membrano de celuloza acetato, kaj estas du modeloj de elektroforezo disponeblaj por la tanko de elektroforezo de membrano de celuloza acetato.DYY-2CkajDYY-6Cnutrado.
Dume, Beijing Liuyi Biotechnology provizas celulozan acetatmembranon por klientoj, kaj la grandeco de celuloza acetatmembrano povas esti personecigita. Bonvenon peti al ni specimenojn kaj pliajn informojn.
Pekina Liuyi-marko havas pli ol 50-jaran historion en Ĉinio kaj la kompanio povas provizi stabilajn kaj altkvalitajn produktojn tra la tuta mondo. Tra jaroj da evoluo, ĝi estas inda je via elekto!
Ni nun serĉas partnerojn, ambaŭ OEM elektroforez-tanko kaj distribuistoj estas bonvenigitaj.
Se vi havas aĉetan planon por niaj produktoj, bonvolu ne hezitu kontakti nin. Vi povas sendi al ni mesaĝon retpoŝte[retpoŝto protektita]aŭ[retpoŝto protektita], aŭ bonvolu voki nin ĉe +86 15810650221 aŭ aldoni Whatsapp +86 15810650221, aŭ Wechat: 15810650221
Afiŝtempo: Sep-20-2023